Avaliação antifúngica de uma solução à base de glucoprotamina e do óleo essencial de Cymbopogon citratusem leveduras de ambiente hospitalar / Antifungal action of a solution based on the glucoprotamine and the essential oil from Cymbopogon citratus on the yeasts from the hospital environment

O objetivo deste estudo foi de avaliar a atividade antifúngica de uma solução à base de glucoprotamina (GLU) e de óleo essencial (OE) de Cymbopogon citratus. Candida tropicalis, Claviceps lusitaniae, Meyerozyma (Pichia) guilliermondii e Candida parapsilosis foram isoladas das superfícies de um hospital público de Pelotas, RS. A atividade antifúngica da GLU foi analisada nas concentrações de 0,25% a 0,0005%, e para o OE, obtido por Clevenger, foi utilizado nas concentrações de 17.500 µg/mL a 0,034 µg/mL. A análise cromatográfica foi efetuada por meio de CG/MS. A atividade anti-Candidafoi analisada pela técnica de Microdiluição em Caldo para determinar a Concentração Inibitória Mínima (CIM) e a Concentração Fungicida Mínima (CFM). A inibição pela GLU ocorreu em todas as concentrações testadas, enquanto o OE apresentou resultado de CIM que oscilou de 2846 a 5450 µg/mL, e CFM de 2853 a 5330 µg/mL. Alfa­citral (37,10%), beta­citral (32,77% e beta-mirceno (18,75%) foram considerados como os compostos majoritários do OE. Os dados obtidos neste trabalho destacam a atividade antifúngica da solução à base de GLU e do OE de C. citratus na eliminação dos isolados de Candida spp ambientais. (AU)

This study aimed at evaluating the antifungal activity of glucoprotamine solution (GLU) and the essential oil from Cymbopogon citratus (EO). Candida tropicalis, Claviceps lusitaniae, Meyerozyma(Pichia) guilliermondii and Candida parapsilosis were isolated from the samples, which were collected from the surfaces of a public hospital located in Pelotas, RS. The antifungal activity of GLU was detected at the concentrations from 0.25% to 0.0005%, while the EO, by Clevenger, was used at concentrations from 17.500 µg mL to 0.034 µg/mL. Chemical analysis was determined by GC/MS. The anti-Candida activity was performed by using Broth Microdilution technique to determine the Minimal Fungicidal Concentration (MFC) and the Minimal Inhibitory Concentration (MIC). The inhibition by GLU occurred at all of the tested concentrations, whereas the EO showed MIC ranging from 2.846 to 5.450 µ/mL and the CFM from 2.853 to 5.330 µg/mL. Alfa­citral (37.10%), beta­citral (32.77%) and beta-mirceno (18.75%) were the majority compounds in the EO. The data obtained in the present study highlight the effectiveness of the solution based on GLU and EO for eliminating the environmental isolates of Candida spp. (AU)

Avaliação antifúngica de uma solução à base de glucoprotamina e do óleo essencial de Cymbopogon citratus em leveduras de ambiente hospitalar / Antifungal action of a solution based on the glucoprotamine and the essential oil from Cymbopogon citratus on the yeasts from the hospital environment

O objetivo deste estudo foi de avaliar a atividade antifúngica de uma solução à base de glucoprotamina (GLU) e de óleo essencial (OE) de Cymbopogon citratus. Candida tropicalis, Claviceps lusitaniae, Meyerozyma (Pichia) guilliermondii e Candida parapsilosis foram isoladas das superfícies de um hospital público de Pelotas, RS. A atividade antifúngica da GLU foi analisada nas concentrações de 0,25% a 0,0005%, e para o OE, obtido por Clevenger, foi utilizado nas concentrações de 17.500 μg/mL a 0,034 μg/mL. A análise cromatográfica foi efetuada por meio de CG/MS. A atividade anti-Candida foi analisada pela técnica de Microdiluição em Caldo para determinar a Concentração Inibitória Mínima (CIM) e a Concentração Fungicida Mínima (CFM). A inibição pela GLU ocorreu em todas as concentrações testadas, enquanto o OE apresentou resultado de CIM que oscilou de 2846 a 5450 μg/mL, e CFM de 2853 a 5330 μg/mL. Alfa–citral (37,10%), beta–citral (32,77% e beta-mirceno (18,75%) foram considerados como os compostos majoritários do OE. Os dados obtidos neste trabalho destacam a atividade antifúngica da solução à base de GLU e do OE de C. citratus na eliminação dos isolados de Candida spp ambientais.

This study aimed at evaluating the antifungal activity of glucoprotamine solution (GLU) and the essential oil from Cymbopogon citratus (EO). Candida tropicalis, Claviceps lusitaniae, Meyerozyma (Pichia) guilliermondii and Candida parapsilosis were isolated from the samples, which were collected from the surfaces of a public hospital located in Pelotas, RS. The antifungal activity of GLU was detected at the concentrations from 0.25% to 0.0005%, while the EO, by Clevenger, was used at concentrations from 17.500 μg mL to 0.034 μg/mL. Chemical analysis was determined by GC/MS. The anti-Candida activity was performed by using Broth Microdilution technique to determine the Minimal Fungicidal Concentration (MFC) and the Minimal Inhibitory Concentration (MIC). The inhibition by GLU occurred at all of the tested concentrations, whereas the EO showed MIC ranging from 2.846 to 5.450 μ/mL and the CFM from 2.853 to 5.330 μg/mL. Alfa–citral (37.10%), beta–citral (32.77%) and beta-mirceno (18.75%) were the majority compounds in the EO. The data obtained in the present study highlight the effectiveness of the solution based on GLU and EO for eliminating the environmental isolates of Candida spp.

Evaluation of phytotherapy alternatives for controlling Rhipicephalus (Boophilus) microplus in vitro / Avaliação de alternativas fitoterápicas no controle in vitro de Rhipicephalus (Boophilus) microplus

Abstract The objective of this study was to identify the main chemical components of the essential oil of Cuminum cyminum L. (cumin) and of the fixed oils of Bertholletia excelsa (Brazil nut) and of Helianthus annuus (sunflower seed). As well as testing the three oils and three different commercial synthetic acaricides against engorged females of Rhipicephalus (Boophilus) microplus in order to explore their acaricidal efficacy. Six different concentrations of the oils (200, 100, 50, 25, 12.5 and 6.25 mg/mL) and the active principles were evaluated with the Adult Immersion Test (AIT). The two main chemicals components of C. cyminum L. were the cuminaldehyde and the γ-terpinene. In both B. excelsa and H. annuus were the linoleic and oleic acid. C. cyminum L. showed high acaricidal activity (100%) over the engorged females and on their reproductive characteristat from the concentration of 100 mg/mL. B. excelsa and H. annuus had low acaricidal activity (39.39% and 58.75% in the concentration of 200 mg/mL respectively). The amidine and the pyrethroid (35.12% and 1.50% respectively). It can be concluded that the oil of C. cyminum L. may be a phytoterapic alternative for the cattle's tick control.

Resumo O objetivo do presente estudo foi identificar os componentes químicos majoritários do óleo essencial de Cuminum cyminum L. (comino) e dos óleos fixos de Bertholletia excelsa (castanha do Brasil) e de Helianthus annuus (semente de girassol). Assim como testar os três óleos e três diferentes acaricidas comerciais sintéticos contra fêmeas ingurgitadas de Rhipicephalus (Boophilus) microplus, para explorar sua eficácia acaricida. Seis concentrações dos óleos (200, 100, 50, 25, 12,5 and 6,25 mg/mL) e os princípios ativos foram avaliados por meio do Teste de Imersão de Adultas (AIT). Os dois componentes químicos majoritários de C. cyminum L. foram o cuminaldeído e o y-terpineno. Nos óleos de B. excelsa e H. annuus os componentes majoritários foram o ácido n linoleico e oleico, respectivamente. C. cyminum L. mostrou alta atividade acaricida (100%) sobre as fêmeas ingurgitadas e suas caraterísticas reprodutivas, a partir da concentração 100 mg/mL., tornando-se uma fonte alternativa para controlar o carrapato do gado. No entanto sao necessários estudos adicionais, a serem conduzidos in vivo. B. excelsa e H. annuus tiveram baixa atividade acaricida (39,39% e 58,75% na concentração de 200 mg/mL respectivamente), não obstante apresentaram maior efeito que a amidina e o piretroide (35,12% e 1,50% respetivamente). Pode-se concluir que o óleo de C. cyminum pode ser uma alternativa fitoterápica para o controle do carrapato do gado.

Análise de bolores e leveduras em queijo tipo minas comercializados em feira livre / Analysis of fungi and yeasts in cheese type mines marketed in fair

O objetivo deste estudo foi analisar a contaminação por bolores e leveduras em queijos tipo Minas, produzido artesanalmente e comercializados em feiras livres na cidade de Pelotas, Brasil. Foram visitadas doze feiras cadastradas no site da Prefeitura de Pelotas e coletadas amostras em oito. As amostras foram coletadas em sacos estéreis e a análise ocorreu no Laboratório de Microbiologia do Instituto de Biologia da Universidade Federal de Pelotas. Foram pesadas 25 gramas de amostra e homogeneizadas em 225 mL de água peptonada 0,1%. Foram realizadas diluições seriadas 10-1 a 10-4 em tubos contendo 9 mL de água peptonada 0,1%. Cada diluição foi vertida em placas de Petri com Ágar Sabouraud Dextrose contendo 9 mL de cloranfenicol e incubadas a 36°C/48horas. Os resultados indicaram contagens de 0,1x104 log UFC/g para bolores, em duas amostras. Verificou-se contagem expressivas de leveduras em seis amostras, variando de 0,8x104 a 33,3x104 log UFC/g. A contaminação por bolores e leveduras no produto demonstra a falta de higiene no processo de fabricação. Concluiu-se que os queijos Minas artesanais apresentaram contaminação por micro-organismos indesejáveis no produto, que podem causar riscos à saúde do consumidor.

Fungi isolated rrom the excreta of wild birds in screening centers in pelotas, rs, Brazil / Fungos isolados de excretas de aves silvestres em centro de reabilitação em Pelotas, RS, Brasil

The identification of the fungal species belonging to the healthy microflora in animals is a precondition for the recognition of pathological processes causing them. The aim of this study was to investigate the presence of potentially pathogenic fungi in the feces of wild birds collected in Screening Centers. Samples were collected from the feces of 50 cages with different species of birds. The samples were processed according to the modified method STAIB and the plates incubated at 32 °C for up to ten days with daily observation for detection of fungal growth. The isolation of the following species was observed: Malassezia pachydermatis, Candida albicans, C. famata, C. guilliermondii, C. sphaerica, C. globosa, C. catenulata, C. ciferri, C. intermedia, Cryptococcus laurentii, Trichosporon asahii, Geotrichum klebahnii, Aspergillus spp., A. niger and Penicillium spp. Knowing the character of some opportunistic fungi is important in identifying them, facilitating the adoption of preventive measures, such as proper cleaning of cages, since the accumulation of excreta may indicate a risk for both health professionals and centers for screening public health.

A identificação das espécies de fungos pertencentes à microbiota saudável em animais é pré-condição para o reconhecimento dos processos patológicos causados por esses. O objetivo deste estudo foi investigar a presença de fungos potencialmente patogênicos nas fezes de aves selvagens coletadas em Centros de Triagem. Foram coletadas amostras de fezes de 50 gaiolas com diferentes espécies de aves. As amostras foram processadas de acordo com o método modificado STAIB e as placas foram incubadas a 32 °C por até dez dias, com observações diárias para detecção do crescimento dos fungos. Observamos o isolamento de espécies: Malassezia pachydermatis, Candida albicans, C. famata, C. guilliermondii, C. sphaerica, C. globosa, C. catenulata, C. ciferri, C. intermedia, Cryptococcus laurentii, Trichosporon asahii, Geotrichum klebahnii, Aspergillus spp., A. niger e Penicillium spp. Conhecendo o caráter de alguns fungos oportunistas resalta-se a importância para identificá-los, facilitando a adoção de medidas preventivas, como a limpeza adequada das gaiolas, uma vez que a acumulação de excrementos pode indicar um risco tanto para os profissionais de saúde e centros de triagem de saúde pública.

Clinical and mycological analysis of dog's oral cavity

The oral microbiota of humans and animals is made up of a wide variety of yeasts and bacteria, but microbiota of dogs is not totally described. Although such identification is an important step to establish the etiopathogenesis and adequate therapy for the periodontal disease The aim of this study was to evaluate and correlate oral alterations with the presence of yeasts in oral cavity of female dogs. After clinical evaluation samples from healthy and from dogs with oral diseases were obtained from three different oral sites by swabs, curettes, millimeter periodontal probes and HA membrane tip in cellulose ester. Yeast identification was performed through macroscopic and microscopic colony features and biochemical tests. Dental calculus was the most prevalent occurrence in the oral cavity of 59 females. However, the isolation of yeasts was significantly higher (p < 0.05) in animals suffering from halitosis. Eleven yeast species were identified, namely: Malassezia pachydermatis, Rhodotorula spp., Candida albicans, C. catenulata, C. famata, C. guilliermondii, C. parapsilosis, C. intermedia, Trichosporon asahii, T. mucoides and Cryptococcus albidus. It could be concluded that the yeasts are part of the microbiota from the different sites of the oral cavity of the female canines studied without causing any significant alterations except halitosis.

In vitro study on the antimicrobial effect of hydroalcoholic extracts from Mentha arvensis L. (Lamiaceae) against oral pathogens / Estudo in vitro do efeito antimicrobiano dos extratos hidroalcólicos de Mentha arvensis L. (Lamiaceae) contra patógenos orais

In vitro tests could be a valuable tool for the evaluation of medicinal plants' antimicrobial activity. Mentha arvensis of the Lamiaceae family is one of the most frequently traditional plants used in Brazil. Hydroalcoholic extracts of M. arvensis were analyzed for antimicrobial activity on Streptococcus mutans, Streptococcus sobrinus and Candida albicans. Three different assays (agar diffusion, broth macro- and micro-dilution methods) were used to evaluate antimicrobial activity. Although hydroalcoholic extracts of M. arvensis did not show any antibacterial effect, its antifungal activity against C. albicans was revealed. According to the micro-dilution broth assay, MIC of the hydroalcoholic extract from leaves of M. arvensis on Candida albicans strains ranged between 625 and 2500 µg mL-1. Results suggest that M. arvensis hydroalcoholic extract may be considered a potentially antifungal agent against C. albicans, and a possible item for human antibiotic therapy. However, further biological tests on the plant's efficacy and side-effects are necessary before its use on humans.

Testes in vitro podem ser uma ferramenta valiosa para a avaliação da atividade antimicrobiana de plantas medicinais. Mentha arvensis é uma das plantas medicinais brasileiras mais frequentemente utilizadas e pertence à família Lamiaceae. No presente estudo, extratos hidroalcólicos de M. arvensis foram analisados quanto à sua atividade antimicrobiana sobre Streptococcus mutans, Streptococcus sobrinus e Candida albicans. Três diferentes ensaios (métodos de difusão em ágar, macro e microdiluição em caldo) foram utilizados para avaliação da atividade antimicrobiana. Embora os extratos hidroalcólicos de M. arvensis não demonstraram qualquer efeito antibacteriano, eles apresentaram atividade antifúngica contra C. albicans. Baseado no ensaio de microdiluição em caldo, a CIM do extrato hidroalcólico das folhas de M. arvensis sobre cepas de C. albicans variaram de 625 a 2500 µg mL-1. Estes achados sugerem que o extrato hidroalcólico de M. arvensis pode ser considerado um agente antifúngico em potencial contra C. albicans, e um possível candidato para antibioticoterapia humana. Contudo, mais testes biológicos sobre a eficácia e efeitos adversos desta planta são necessários antes do seu uso em humanos.

Mycological analysis of ambrosia and creamy dulce de leche / Análise micológica de ambrosia e doce de leite pastoso

Creamy dulce de leche is a product made from concentrated milk by heating, and adding sucrose. Ambrosia is a variety of dulce de leche prepared by adding eggs and sugar in to milk. Aiming at identifying the genera of filamentous fungi isolated from creamy dulce de leche and ambrosia, 40 ambrosia and 20 creamy dulce deleche samples were analyzed in the present study. Filamentous fungi and yeast counts and the identification of genera of the isolated filamentous fungi were performed. Thirty-nine samples (65 per cent) showed filamentous fungi and yeast counts that exceeded the accep table limits. Six fungus genera were identified, and amongthem the Penicillium was the most frequent. These findings are a warning of the requirement for strict control on good manufacturing practices as well as on the inspection and monitoring of ambrosia andcreamy dulce de leche trading.

Molecular heterogeneity of Malassezia pachydermatis through RAPDPCR / Heterogeneidade molecular da Malassezia pachydermatis através de RAPD-PCR

Several methodologies in molecular biology have been used in theinvestigation of Malassezia pachydermatis and its differentiation into subtypes. Recentmolecular research of this species includes the use of samples isolated from canine otitisexterna and dermatitis, as well as from healthy animals, having in view an epidemiologicalstudy of the yeast. The aim of this study was to identify molecular differences in M.pachydermatis samples isolated from dogs with otitis externa. The M. pachydermatis strainswere analyzed by means of the Random Amplification Primer DNA - Polimerase ChainReaction (RAPD–PCR) for molecular heterogeneity research. DNA extraction was carriedout with phenol-chloroform and the RAPD technique using the AGAATCCGCC primer.A variation was observed in the number and arrangement of the bands among the 49studied isolates, grouped into nine patterns. Isolate groupings were not found to be relatedto animal breed, age or sex. It was concluded that M. pachydermatis has differences in itsmolecular profile, as shown by the molecular technique (RAPD – PCR), which allowsisolates to be classified into nine subtypes.

Várias metodologias em biologia molecular têm sido aplicadas para estudar aM. pachydermatis diferenciando-a em subgrupos. Recentemente utiliza-se a investigaçãomolecular desta espécie isolada de otite externa e dermatite, e também de isolados da mesmade animais hígidos, para um estudo epidemiológico da levedura. O objetivo deste trabalhofoi identificar diferenças moleculares entre isolados de M. pachydermatis obtidos de casos deotite externa canina. Para isto, amostras da levedura provenientes de cães com estaenfermidade foram estudadas através da técnica de Polimorfismo de DNA Amplificado aoAcaso - Reação da Polimerase em Cadeia (RAPD–PCR) para pesquisa de heterogeneidademolecular. A extração de DNA foi realizada no processo fenol-cloroformio e a técnica deRAPD foi estudada com o primer AGAATCCGCC. Pode-se observar com estametodologia, variação no número e posição das bandas entre os 49 isolados estudados,podendo-se agrupá-los em nove padrões. Os agrupamentos formados pelos isolados nãoapresentaram relação com raça, idade ou sexo do animal. Concluindo-se que a M.pachydermatis apresenta diferenças em seu perfil molecular, observado pela técnica molecular(RAPD-PCR) que permite classificar os isolados desta espécie em até nove subtipos.

Ocorrência de Cryptococcus neoformans em excretas de pombos na cidade de Pelotas, Estado do Rio Grande do Sul / Occurrence of Cryptococcus neoformans in pigeon excrement in the city of Pelotas, State of Rio Grande do Sul

INTRODUÇÃO: O Cryptococcus neoformans é uma levedura capsulada, agente etiológico da criptococose em humanos e animais, encontrado em fontes ambientais, incluindo excretas de pombos, é uma importante causa de mortalidade em indivíduos imunodeprimidos em todo o mundo. MÉTODOS: Com o objetivo de verificar a ocorrência do Cryptococcus neoformans, em excretas de pombos, na Cidade de Pelotas, pesquisou-se 70 ambientes, incluindo prédios, praças e locais ao ar livre, da Cidade de Pelotas, RS. Após a coleta, os excrementos foram adicionados de salina com cloranfenicol, homogeneizados, semeados em ágar Sabouraud com cloranfenicol e ágar Níger e incubados a 32ºC. Para identificação, realizou-se exame direto, prova da fenoloxidase, urease, assimilação de carboidratos e cultura em meio CGB. RESULTADOS: Dos locais estudados (nº =70), em 26 (37,1 por cento) havia excretas de pombos. Estes lugares foram representados por prédios históricos (nº =8), torre de igreja (nº =1), engenhos e armazéns de arroz (nº =7), praça (nº =1) e locais ao ar livre (nº =9), o isolamento de Cryptococcus neoformans ocorreu em 26,9 por cento (nº =7/26), destes locais. CONCLUSÕES: O estudo chama a atenção, para o isolamento do fungo em áreas urbanas, que apresentavam grande acúmulo de excretas, indicando um risco para a saúde pública, especialmente para indivíduos imunocomprometidos.

INTRODUCTION: Cryptococcus neoformans is an encapsulated yeast and is the etiological agent for human and animal cryptococcosis. It is found in sources within the environment, including pigeon excrement, and is an important cause of mortality among immunocompromised individuals worldwide. METHODS: Seventy different environments in the city of Pelotas, Rio Grande do Sul, were surveyed for the purpose of investigating Cryptococcus neoformans occurrences in pigeon excreta. The environments included buildings, public squares and outdoor locations in the city. After collection, chloramphenicol saline solution was added to the excreta, which were then homogenized and seeded onto Sabouraud agar with chloramphenicol and onto Niger agar, and incubated at 32°C. Identification was performed by direct examination and by means of the phenoloxidase and urease tests, carbohydrate assimilation and culturing in CGB medium. RESULTS: Out of the sites investigated (n = 70), 26 (37.1 percent) of them contained pigeon excreta. These included historical buildings (n = 8), a church tower (n = 1), rice mills and warehouses (n = 7), a public square (n = 1) and outdoor locations (n = 9). Cryptococcus neoformans was isolated from 26.9 percent (n = 7/26) of these locations. CONCLUSIONS: This study draws attention to isolation of this fungus in urban areas that present large accumulations of pigeon excrement. This represents a risk to public health, especially for immunocompromised individuals.

Análise microbiológica de salame tipo alemão vendido em feiras-livres / Microbiological analysis of german salami sold in free markets

Os alimentos são passíveis de contaminação por diferentes agente etiológicos, tanto microrganismo como suas toxinas. O presente estudo objetivou analisar microbiologicamente amostras de salames do tipo alemão produzidos artesanalmente e comercializados nas feiras livres da cidade de Pelotas, RS, Brasil. Esta cidade conta com 12 feiras livres cadastradas na Prefeitura e distribuídas em diferentes locais sendo que a realização de cada uma ocorre semanalmente. Os salames foram adquiridos aleatoriamente em cada uma das feiras e a análise microbiológica foi realizada no Laboratório de Microbiologia do Instituto de Biologia da UFPel, sendo a metodologia realizada conforme legislação em vigor da Agência Nacional de Vigilância Sanitária –ANVISA. O alimento foi encontrado em dez (83,3%) feiras, totalizando dez amostras. Após a análise, observou-se que em somente uma (10%) amostra isolou-se Staphylococcus coagulase positiva. Quanto à Salmonella sp. e Coliformes a 45ºC não houve isolamento em nenhuma amostra. Esta análise microbiológica demonstrou que as amostras de salame “alemão” comercializadas nas feiras livres de Pelotas estão livres de contaminação pelos microrganismos entéricos patogênicos Salmonella sp e Coliformes a 45ºC, o que representa um aspecto positivo para este comércio. Entretanto, a presença de Staphylococus coagulase positiva, em uma das amostras, evidencia risco de intoxicação alimentar.

CLSI broth microdilution method for testing susceptibility of Malasseziapachydermatis to thiabendazole / CLSI método de Microdiluição em Caldo para teste de suscetibilidade da Malassezia pachydermatis frente ao tiabendazol

Thiabendazole, classified as antiparasitic and also used as an antifungal drug, can be found as otological solution indicated for treatment of parasitic and fungal external otitis in small animals. Malassezia pachydermatis is a yeast recognized as a normal inhabitant on the skin and mucous membranes of dogs andcats. However, it is considered an opportunistic agent that causes external otitis and dermatitis in these animals. The aim of this study was to evaluate the in vitro effect of thiabendazole against 51 isolates of M. pachydermatis using the CLSI Broth Microdilution method that has been adapted for this yeast species (NCCLS, 2002). Based on this test, the Minimum Inhibitory Concentrations (MIC) of thiabendazol was calculated. Subsequently, the susceptibility of each isolate against this antifungal was determined. It wasobserved that the MIC of thiabendazole against M. pachydermatis ranged from 0.03 to > 4 μg/mL. A total of 13.7% of the isolates were found to be resistant, 47.1% were intermediate and 39.2% were sensitive to the drug. The rate of resistance of the yeasts against thiabendazole was similar to the results previously obtained with other antifungals, while the adapted broth microdilution technique used in this study proved to be efficient.

Tiabendazol, um fármaco classificado como antiparasitário e também usado como antifúngico, pode ser encontrado como solução otologica indicada no tratamento da otite externa parasitária e fungica em pequenos animais. Malassezia pachydermatis é uma levedura considerada habitante normalda pele e das mucosas de cães e gatos. Entretanto, considerase um agente do oportunista causador de otite externa edermatite nestes animais. A finalidade deste estudo foi avaliar o efeito in vitro do tiabendazol frente a 51 amostras de M. pachydermatis através do método CLSI de Microdiluição em Caldo adaptado para esta espécie de levedura (NCCLS, 2002). Baseado neste teste calculou-se as Concentrações InibitóriasMínimas (CIM) do tiabendazol e, subseqüentemente, foi detectada a suscetibilidade de cada amostra frente a este antifungico. Observou-se que a CIM do tiabendazol frente a M. pachydermatis variou de 0,03 a > 4 μg/mL. Estas amostras foram classificadas em resistente (13,7%), sensibilidade intermediária (47,1%) e sensível (39,2%). A resistência dalevedura frente ao tiabendazol mostrou similaridade com resultados anteriormente observados com outros antifúngicos e a adaptação da técnica de Microdiluição em Caldo utilizada mostrou-se eficiente.

Comparison of the broth microdilution technique and ETEST to ketoconazole front Malassezia Pachydermatis / Comparação da técnica de microdiluição em caldo e ETEST para o cetoconazol frente à Malassezia pachydermatis

Malassezia pachydermatis is recognized as a normal inhabitant and an opportunistic pathogen of the external ear canal and skin of dogs and cats. In special clinical conditions, and mainly in the cases of therapeutic failure related to external otitis and dermatitis complicated by this yeast, is recommended testing susceptibility to antifungal drugs. Different approaches of evaluating the susceptibility of yeasts faced to antifungals in laboratory exist, some of them are commercial approaches and others previously standardized by the CLSI (NCCLS,2002). The purpose of this study was to evaluate the susceptibility of 17 samples of M. pachydermatis from canine external otitis using two different in vitro antifungal susceptibility methods: the Etest®and the broth Microdilution Method (MD) with ketoconazole. The mean MIC observed between the 17 samples were 0.103mg/mL to ETEST and 0.0012mg/mL to MD ranging from 0.004 to 0.75mg/mL in ETEST and 0.0019 and 0.03mg/mL in MD using the same samples. By ETEST, two (11.8%) samples were resistant, eight(47.1%) susceptible and seven (41.1%) showed intermediate susceptibility. Through the MD it was observed four (23.5%) resistant samples, seven (41.2%) susceptible and six (35.3%) samples with intermediate susceptibility. Despite of the percentages being equivalent in each rank of susceptibility through the two techniques, the results do not correspond to the same sample. These results showed that there is an urgent need to standardize those values considered as parameters for growth inhibition of this yeast. Then a simple and efficient method could be used routinely in the laboratory practice.

Malassezia pachydermatis é reconhecida como um habitante normal e patógeno oportunista do meato acústico externo e da pele de cães e gatos. Em condições clínicas especiais e em casos de falha terapêutica relatada em otite externa e dermatite complicada por esta levedura, é recomendado o teste de suscetibilidade antifúngica. Existem diferentes métodos de avaliação da suscetibilidade da levedura frente a antifúngicos em laboratório, alguns métodos comerciais e outros previamente padronizados pelo CLSI (NCCLS, 2002). O objetivo deste estudo foi o de avaliar a suscetibilidade de 17 amostras de M.pachydermatis proveniente de otite externa canina por meio de duas técnicas in vitro de antifungigramas: o Etest® e a microdiluição em caldo (MC) com o cetoconazol. A media da Concentração Inibitória Mínima (CIM) observada entre as 17 amostras foram 0.103mg/mL para o ETEST e 0.0012mg/mL para a MC variando de 0.004 a0.75mg/mL no ETEST e entre 0.0019 e 0.03mg/mL na MC usando as mesmas amostras. Pelo ETEST, duas (11.8%) amostras foram resistentes, oito (47.1%) sensíveis e sete (41.1%) mostraram sensibilidade intermediária. Na MC foram observadas quatro (23.5%)amostras resistentes, sete (41.2%) sensíveis e seis (35.3%) amostras com sensibilidade intermediária. Apesar das porcentagens de sensibilidade serem semelhantes pelas duas técnicas, os resultados de CIM não correspondem na uma mesma amostra. Estes resultados mostraram que há uma urgente necessidade de padronização dos valores considerados como parâmetros para inibição do crescimento da levedura. Portanto, um método simples e eficiente deveria ser usado rotina na prática de laboratório.

Efeitos de doses elevadas da terbinafina e itraconazol em ratos Wistar / Effects of high doses of terbinafine and itraconazole in Wistar rats

Levando em consideração a importância do itraconazol e da terbinafina na terapia antifúngica, o estudo tem como objetivo avaliar os efeitos de altas doses de itraconazol (100 mg/kg) e terbinafina (250 mg/kg) em ratos albinos wistar através das análises das enzimas hepáticas (ALT e ALP), hemograma completo e estudo histopatológico de diferentes órgãos. Os fármacos foram administrados pela via oral, uma vez ao dia, por um período de 30 dias, quando foi coletado sangue e realizado a necrópsia dos animais experimentais. Os valores detectados das enzimas hepáticas e do hemograma foram compatíveis aos índices fisiológicos para a espécie estudada não sendo observadas diferenças estatísticas entre os grupos experimentais. A histopatologia não revelou nenhuma anormalidade, porém 25 por cento dos animas tratados com terbinafina morreram imediatamente após a administração do fármaco. Com esses resultados concluiu-se que as doses administradas dos fármacos não alteraram as enzimas hepáticas avaliadas, assim como o hemograma, sendo, no entanto, necessários mais estudos que possibilitem considerar doses elevadas da terbinafina e itraconazol como alternativa terapêutica viável para o tratamento de micoses sistêmicas.

Taking into account the importance of the itraconazole and terbinafine in the antifungal therapy, the study has as objective evaluate the effects of high itraconazole doses (100 mg/kg) and terbinafine (250 mg/kg) in rats albino Wistar through the analyses of the hepatic enzymes (ALT and ALP), complete blood count and histopathologic study of different organs. The drugs were administered orally once a day, for a period of 30 days, when blood was collected and accomplished the necropsy of the experimental animals. The detected values of the hepatic enzymes and of the blood count were compatible to the physiologic indexes for the studied species with no statistical differences among the experimental groups. The histopathologic exam did not reveal any abnormality, however 25 percent of the treated with terbinafine died immediately after the administration of the drug. With those results we concluded that the administered doses of the drugs did not alter the appraised hepatic enzymes, as well as the blood count. However, more studies are needed to consider high doses of the terbinafine and itraconazole as viable treatment alternative for systemic mycosis.

Suscetibilidade in vitro de isolados de Sporothrix schenckii frente à terbinafina e itraconazol / In vitro susceptibility of isolates of Sporothrix schenckii to terbinafine and itraconazole

O estudo objetiva determinar a atividade in vitro da terbinafina e itraconazol através da técnica de microdiluição em caldo (NCCLSM27-A2) adaptado para um fungo dimórfico frente a 12 isolados de Sporothrix schenckii, sendo seis de esporotricose felina, três de esporotricose humana, um isolado de cão e dois isolados humanos provenientes do Instituto Oswaldo Cruz (IOC). O inóculo e as concentrações antifúngicas foram distribuídas em microplacas, as quais foram incubadas a 35°C por cinco dias, quando foi realizada a leitura da concentração inibitória mínima. A concentração inibitória mínima para a terbinafina variou de 0,055µg/ml a 0,109µg/ml e para o itraconazol de 0,219µg/ml a 1,75µg/ml, sendo que para ambos os fármacos as CIMs entre os isolados do IOC foi de 0,875µg/ml. O estudo demonstrou uma alta suscetibilidade do Sporothrix schenckii frente à terbinafina, necessitando mais estudos que correlacionem os testes in vitro frente ao fármaco com a resposta clínica em pacientes com esporotricose.

The study objective was to determine the in vitro activity of terbinafine and itraconazole through the microdilution technique in broth (NCCLSM27-A2), adapted for dimorphic fungus, in relation to 12 isolates of Sporothrix schenckii. Six were from feline sporotrichosis, three from human sporotrichosis, one from a dog and two from human isolates originating from Instituto Oswaldo Cruz. The inoculum and antifungal concentrates were distributed on microplates that were incubated at 35°C for five days. Minimum inhibitory concentration readings were made at the end of this period. The MIC for terbinafine ranged from 0.055µg/ml to 0.109µg/ml, and the MIC for itraconazole ranged from 0.219µg/ml to 1.75µg/ml. For both drugs, the MIC from the isolates from IOC was 0.875µg/ml. The present study demonstrates the high susceptibility of Sporothrix schenckii to terbinafine. Further studies to correlate the in vitro susceptibility tests with the clinical response of patients with sporotrichosis are needed.

Isolation of Sporothrix schenkii from the nails of healthy cats

Many cases of sporotrichosis in cats were diagnosed in the town of Rio Grande, RS, Brazil, caused mainly by inoculation due to scratches. In this work, we evaluated the frequency of Sporothrix schenckii in the nails of healthy cats living together with cats showing clinical sporotrichosis. The isolation of the fungus was carried out pressing unwashed nails of the forelimbs of 24 cats (48 paws) directly onto the surface of Mycobiotic Agar in Petri dishes. S. schenckii was isolated from seven (29.1 percent) cats. The procedure for isolation of the fungus was simpler than methods that require sedation and cuts of the nails.

Um número elevado de casos de esporotricose em gatos foi diagnosticado na cidade de Rio Grande/RS/Brasil, e na maioria dos animais, a doença ocorreu após inoculação do fungo a partir de arranhões. Nesse estudo, avaliou-se a freqüência de Sporothrix schenckii nas unhas de gatos saudáveis que conviviam com gatos com esporotricose. O isolamento do fungo foi realizado a partir da impressão das unhas dos membros torácico direito e esquerdo, de 24 gatos (48 patas), diretamente em placas de Petri com Agar Mycobiotic sem lavagem prévia das unhas. S. schenckii foi isolado de sete gatos (29,1 por cento). O procedimento adotado para o isolamento do fungo foi mais simples que os procedimentos que requerem sedação e corte das unhas do animal.

Isolation of Candida spp from vaginal microbiota of healthy canine females during estrous cycle

As leveduras são organismos comensais da pele, trato genital e gastrointestinal, e de outras mucosas de mamíferos. O gênero Candida vem sendo isolado freqüentemente de animais domésticos e silvestres. O isolamento de Candida spp da mucosa vaginal de mulheres é freqüente, porém na espécie canina são escassos os estudos referentes à microbiota fúngica vaginal, especialmente do gênero candida, não se tendo conhecimento de sua relacão com o ciclo reprodutivo. O presente trabalho teve como objetivo isolar leveduras do gênero Candida em fêmeas caninas hígidas e identificar as espécies isoladas, relacionando-as com as diferentes fases do ciclo estral. Foram analisadas 224 amostras obtidas da mucosa vaginal de 14 fêmeas caninas. Candida spp foi observada em 83 (37 per center) amostras, destas, nove (42,9per center) foram obtidas no proestro, 14 (43,8 per center) no estro, 31 (62 per center) no diestro, 24 (21,1 per center) no anestro e cinco (71,4 per center) de gestantes. Nas amostras caracterizadas, C. parapsilosis foi a espécie isolada com maior freqüência (21,7 per center), seguida de C. guillermondii (8,4 per center), C. kefir (6 per center) e C. albicans (4,8 per center). Com base neste estudo pode-se concluir que Candida spp faz parte da microbiota vaginal de fêmeas caninas hígidas, e que o isolamento é influenciado pelo ciclo reprodutivo.

Esporotricose felina com envolvimento humano na cidade de Pelotas, RS, Brasil / Feline sporotrichosis with human envolvement in Pelotas city, RS, Brazil

A esporotricose é uma micose subcutânea, causada pelo fungo dimórfico Sporothrix schenckii. O presente estudo descreve a ocorrência de esporotricose felina na cidade de Pelotas (Rio Grande do Sul - Brasil), e a transmissão para um atendente da clínica veterinária, ocasionada pela arranhadura do animal doente. O felino apresentava deformação do espelho nasal e lesões cutâneas, enquanto o humano apresentava uma lesão ulcerada na região metacarpiana dorsal esquerda. Foram colhidas crostas e/ou exsudato das lesões do felino e do atendente para diagnóstico micológico, os quais foram cultivados em ágar Sabouraud dextrose acrescido de cloranfenicol e incubados a 25 e 37ºC, durante 10 dias. O isolamento do S. schenckii confirmou o diagnóstico clínico de esporotricose cutânea disseminada no felino e cutânea localizada no atendente. Esta nota pretende alertar profissionais relacionados à clínica de pequenos animais quanto à existência da doença e o alto risco de transmissão pela mordedura e/ou arranhadura de animais infectados.

Evaluation of Malassezia pachydermatis antifungal susceptibility using two different methods

Malassezia pachydermatis é considerada um habitante normal e patógeno oportunista do meato acústico externo e tegumento cutâneo de cães e gatos. Em condicões clínicas especiais e nos casos de fracasso terapêutico, comum em casos de otite externa ou dermatite complicadas por esta levedura, é recomendado testar a sensibilidade aos antifúngicos. O objetivo do trabalho foi avaliar a sensibilidade de 44 isolados de M. pachydermatis do meato acústico externo e do tegumento cutâneo de cães e gatos, através de duas técnicas de antifungigrama: ETEST e Microdiluicão em Caldo (MC). Foram testadas 35 amostras pelo método ETEST (1994) e 24 pelo método de MC e 15 pelos dois testes. Os antifúngicos utilizados foram: cetoconazol (KTZ), fluconazol (FLZ) e itraconazol (ITZ). Através da MC, a levedura foi menos sensível ao ITZ, enquanto que o antifúngico com maior atividade foi o KTZ. M. pachydermatis foi mais sensível ao ITZ pelo ETEST, enquanto a droga menos ativa foi o FLZ. A avaliacão simultanea através das duas técnicas aponta o FLZ como o antifúngico com maior concordância entre os resultados (64,3 per center), seguido pelo KTZ (57,1 per center) e ITZ (28,6 per center). Os resultados indicam que há uma necessidade urgente de padronizacão dos valores de inibicão do crescimento desta levedura para que um método, simples e eficaz, possa ser amplamente utilizado na rotina laboratorial.

Drogas antifúngicas para pequenos e grandes animais / Antifungical drugs for small and large animals

As drogas antifúngicas säo classificadas em agentes químicos clássicos e atuais e em antibióticos. Os agentes químicos clássicos säo aqueles medicamentos que apresentam de maneira geral espectro de açäo reduzido contra fungos, atuando como fungistático de modo indireto ao modificar as condiçöes locais, como por exemplo o iodo, os ácidos graxos e derivados, ácido salicílico, tolnaftato e tolciclato. Os agentes químicos atuais säo representados pelos imidazóis e triazóis, flucitosina e alilaminas e os antibióticos representados pelos poliênicos (anfotericina B, nistatina e natamicina) e a griseofulvina. A descriçäo de cada antifúngico considerado será apresentada no trabalho.